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      產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

      SUMO 蛋白酶

      簡(jiǎn)要描述:

      SUMO 蛋白酶公司正在出售的產(chǎn)品:袋鼠腎細胞 生長(cháng)激受體封閉多肽 牛腎盂腎炎棒桿菌PCR檢測試劑盒 大鼠胎盤(pán)生長(cháng)因子(PLGF)ELISA檢測試劑盒 性磷(ACP)活性比色法檢測試劑盒 大西洋王祖農菌 延伸突觸蛋白2抗體

      更新時(shí)間:2024-01-12

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      SUMO 蛋白酶

      商品屬性:

      產(chǎn)品名稱(chēng)

      規格

      貨號

      SUMO 蛋白酶

      1000U

      A-PJ1110

      也稱(chēng)為 UIP 蛋白酶(分子量 26kD),是一種具有較高活性的半胱氨蛋白酶。SUMO 蛋白酶以一種非常特異的方式切割蛋白,它特異性識別 UBL 蛋白的三級結構-SUMO,而不是氨基酸序列,故該蛋白酶可以切割重組融合蛋白的 SUMO。切割的最佳溫度為 30°C,該酶作用溫度和 PH 范圍(pH7-9)都比較廣泛。酶切后,可通過(guò)Ni-NTA Resin 親和純化很容易地將 SUMO 去除。該 SUMO蛋白酶是自 E.coli 表達經(jīng)親和純化的重組蛋白酶,含有 His標簽。65.jpg

      活性定義:在 1XSUMO Protease Buffer (50 mM Tris-HCl,pH 8.0, 0.2% Igepal, 1 mM DTT)中,30°C 反應 1h,剪切>85%的 100pmol 底物,所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。
      儲存:SUMO 蛋白酶置于-20°C 可保存 2 年。

      2. 混勻上述體系后于 30°C 孵育 1-16 小時(shí)。若蛋白為熱不穩定性,請在 4°C 孵育較長(cháng)時(shí)間或增加酶用量。
      3. 取樣品進(jìn)行 SDS-PAGE 分析。
      注意事項
      為達到好的酶切效果,請保證重組蛋白為部分純化的蛋白。對于大部分融合蛋白,SUMO 蛋白酶所需 NaCl 的濃度不同的蛋白情況會(huì )有所差別,可根據實(shí)際情況在0~300mM 之間調節 NaCl 的濃度以達到最佳的效果。QQ截圖20240110094643.jpg



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      PCR基本步驟及注意事項?

      一、實(shí)驗原理

      PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類(lèi)似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類(lèi)似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列,實(shí)現對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個(gè)反應的緩沖環(huán)境;反應過(guò)程同生物體內一樣,DNA雙鏈打開(kāi),引物結合模板,延伸形成新鏈。而這些過(guò)程在生物體內靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過(guò)控制反應溫度實(shí)現的。如常用94℃變性模板DNA打開(kāi)雙鏈,在退火溫度處引物結合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過(guò)程即可實(shí)現對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環(huán)開(kāi)始才產(chǎn)生出和靶DNA區段相同的DNA分子,進(jìn)一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區段的指數加倍。

      在擴增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來(lái)呈指數擴增的反應變成平坦的曲線(xiàn),產(chǎn)物不再隨循環(huán)數而明顯上升,這稱(chēng)為平臺效應。平臺期(Plateau)會(huì )使原先由于錯配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調節循環(huán)次數,在平臺期前結束反應, 減少非特異性產(chǎn)物。到達平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數取決于樣品中模板的拷貝。

      二、主要的成分

      1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產(chǎn)物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類(lèi)型的模板,其主要不同在于預變性的時(shí)間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時(shí)間10min足夠,質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產(chǎn)物預變性2min即可。

      注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過(guò)在第一輪循環(huán)時(shí)只有一個(gè)引物結合,合成另一條鏈。從第二輪開(kāi)始,兩個(gè)引物均與特異位點(diǎn)結合,從而實(shí)現了與常規PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進(jìn)行PCR擴增,原因就在于實(shí)現PCR反應的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

      2.對于模版的量來(lái)說(shuō),一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結構比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止濃度過(guò)大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進(jìn)行梯度稀釋。否則濃度過(guò)高則可能會(huì )引起非特異性擴增。對于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結構簡(jiǎn)單,且提取濃度一般較低,則無(wú)需稀釋。

      PCR實(shí)驗中應該注意的問(wèn)題有哪些?

      沒(méi)有ct值

      檢測結果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問(wèn)題:

      1、循環(huán)數不夠(一般不超過(guò)45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準);

      2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時(shí)采集,TaqMan法則一般在退火結束時(shí)或延伸時(shí)采集信號,另外熒光采集是否選中;

      3、引物或探針降解??赏ㄟ^(guò)PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

      4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過(guò)500ng,根據試劑盒說(shuō)明書(shū)即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應考慮樣本準備中雜質(zhì)的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

      5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過(guò)4℃以上也會(huì )影響擴增)。

      ct值過(guò)晚

      在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數的樣品,Ct值會(huì )增大, 但是一般不宜超過(guò)40循環(huán), 否則定量不準確。

      因此,判斷Ct值出現過(guò)晚是否屬于非正常情況, 需要根據具體實(shí)驗設計和目的進(jìn)行。

      1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進(jìn)行優(yōu)化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;

      2、PCR程序不合適, 改用三步法進(jìn)行反應, 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時(shí)間短(可以在推薦的時(shí)間條件下延長(cháng)10s);

      3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

      4、PCR產(chǎn)物太長(cháng)。PCR產(chǎn)物設計超過(guò)500bp;

      5、模板中存在抑制物。用高純度模板進(jìn)行PCR檢測或將模板進(jìn)行稀釋。

      公司正在出售的產(chǎn)品:

      牛呼吸道合胞體病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

      β-微精原蛋白ELISA試劑盒 MSMB/PRSP免費代測試劑

      煙草花葉病毒探針?lè )晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

      登革病毒3PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

      蛋白酪氨激2βELISA試劑盒 PTK2β免費代測試劑

      貓血支原體PCR檢測試劑盒直銷(xiāo)

      腸道病毒EV(EV-)核檢測試劑盒

      囊蟲(chóng)病抗體ELISA試劑盒

      馬節桿菌PCR檢測試劑盒

      口蹄疫病毒PCR檢測試劑盒

      蛋白體亞基α1ELISA試劑盒

      馬紅球菌染料法熒光定量PCR試劑盒

      貓皰疹病毒探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      端粒重復結合因子2相互作用蛋白ELISA試劑盒

      鴨腺病毒探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      蜱傳出血熱病毒探針?lè )晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

      多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉移12ELISA試劑盒

      對蝦傳染性肌肉壞死病毒(IMNV)核檢測試劑盒

      破傷風(fēng)桿菌PCR檢測試劑盒

      二甲基精氨二水解2ELISA試劑盒

      禽傳染性支氣管炎病毒荷蘭株探針?lè )晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

      貓嗜衣原體探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      法尼基轉移βELISA試劑盒

      勞森菌通用PCR檢測試劑盒

      貓冠狀病毒PCR檢測試劑盒

      芳基硫酯KELISA試劑盒

      諾如病毒通用探針?lè )晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

      派琴蟲(chóng)通用PCR檢測試劑盒

      分揀連接蛋白11ELISA試劑盒

      馬杜拉放線(xiàn)菌PCR檢測試劑盒價(jià)格

      流感嗜血桿菌PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

      人膽紅氧化代謝物 ELISA檢測試劑盒

      禽痘病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格

      牛蒡子染料法PCR鑒定試劑盒

      人他克(FK506)試劑盒elisa

      三代蟲(chóng)探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      鼠附紅細胞體(鼠嗜血支原體)染料法熒光定量PCR試劑盒

      人百日咳病毒抗體(IgA)ELISA試劑盒

      白堊立克次氏體PCR檢測試劑盒

      海魚(yú)分枝桿菌PCR檢測試劑盒

      β乳糖蛋白抗體IgG 試劑盒ELISA

      SUMO 蛋白酶產(chǎn)腸毒性大腸桿菌O139血清型探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      鵝源性成分(Goose)核檢測試劑盒

      人催產(chǎn)受體(OXTR)ELISA檢測試劑盒

      病毒H5N1亞型(AIV-H5N1)核檢測試劑盒

       


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